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核酸和蛋白質是組成生命的主要生物大分子，兩者的相互作用是構成生命活動的生長、繁殖、運動、遺傳和代謝等生命活動的基礎。研究蛋白質和核酸間的相互作用是人們探索生命現象奧秘的關鍵，CHIP檢測實驗是應用于蛋白與核酸互作關系的重要參考。

【應用簡介】

核酸和蛋白質是組成生命的主要生物大分子，兩者的相互作用是構成生命活動的生長、繁殖、運動、遺傳和代謝等生命活動的基礎。研究蛋白質和核酸間的相互作用是人們探索生命現象奧秘的關鍵，ChIP檢測實驗是應用于蛋白與核酸互作關系的重要參考。

【實驗原理】

CHIP實驗在活細胞狀態下固定蛋白質－DNA復合物，并將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，然后通過免疫學方法沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。

【實驗方法】

Step1：細胞培養物交聯和樣品制備

Step2： 胞核制備和染色質消化

Step3：染色質消化和濃度分析

Step4：染色質免疫沉淀法

Step5：將染色質從抗體/Protein G Magnetic Beads上洗脫下來并解交聯

Step6：使用離心柱純化 DNA

Step7：用 PCR定量 DNA

【常見問題】

1、消化的染色質濃度過低。

2、染色質消化不足且片段過大（大于900 bp）。

3、樣品輸入對照組PCR反應中無產物或產物很少。

4、陽性對照組蛋白H3-IP RPL30 PCR反應中無產物。

5、陰性對照 Rabbit IgG-IP 和陽性對照 Histone H3-IP PCR 反應中產物的數量相等。

【注意事項】

1、ChIP實驗要求必須是新鮮的組織或活細胞，一次實驗需至少需要150 mg新鮮的組織或2x10?個細胞，如不能提供新鮮的組織或活細胞，請聯系客服，獲得預處理方法；

2、部分抗體級別可能達不到ChIP級別的要求，需要采購對應級別的抗體并通過陰陽性實驗反饋結果可信性；

3、ChIP對照：現有陽性對照H3和陰性對照IgG；

4、采用CST品牌的SimpleChIP? Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)試劑盒用于本實驗。