CCK8/MTT
▼ 服務介紹
【實驗原理】
細胞增殖/毒性檢測試劑盒（CCK-8 法）是基于高度水溶性的四唑鹽 WST-8（2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2，4-二磺基苯）-2H-四唑單鈉鹽）來進行測定的。WST-8 在電子介體的作用下可還原生成水溶性甲瓚產物，產生顏色反應。CCK-8 是非放射性的，可在細胞增殖和細胞毒性實驗中，對活細胞進行靈敏的比色測定，從而計算出細胞數量。WST-8 被細胞中的脫氫酶還原而生成橙色產物（甲瓚），可溶于組織培養基中。細胞中脫氫酶產生的甲瓚產物的量與活細胞的數量成正比。
【實驗方法】
a. 細胞計數方案
1)在 96 孔板中接種細胞懸液（100 μL/孔）。將板在潮濕的培養箱中預先培養（例如 37℃，5% CO2）；
2)在平板的每個孔中加入 10 μL CCK-8 溶液，注意不要將氣泡引入孔中，因為它們會干擾 OD 值讀取；
3)在培養箱中將平板孵育 1-4 h；時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定；
4)使用酶標儀測量 450 nm 處的吸光度。
b. 細胞增殖/毒性檢測方案
1)在 96 孔板中接種 100 μL 細胞懸液（5×103 個細胞/孔）。將板在潮濕的培養箱中預培養 24h（例如 37℃，5% CO2）；
2)在平板中加入 1-10 μL 各種濃度的待測物質； 3. 在培養箱中將平板孵育適當的時間（例如 6、12、24 或 48 h）； 4. 向板的每個孔中加入 10 μL CCK-8 溶液，注意不要將氣泡引入孔中，因為它們會干擾 OD 值讀取； 5. 在培養箱中將平板孵育 1-4 h；時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定； 6. 使用酶標儀測量 450 nm 處的吸光度。
【常見問題與注意事項】
1)由于 CCK-8 分析基于活細胞中脫氫酶活性的檢測，因此影響活細胞中脫氫酶活性的條件或化學物質可能會導致實際活細胞數與使 用 CCK-8 分析確定的細胞數之間存在差異；
2)混合或重懸組分時，避免產生氣泡，因為它們會影響 OD 值讀取；
3)孵育時間因孔中細胞的類型和數量而異。通常，白細胞著色較弱，因此可能需要較長的孵育時間（最多 4 h）或大量細胞（~105 個細胞/孔）；
4)如果由于長期培養而改變了培養基的顏色或 pH，請在添加 CCK-8 時更換培養基；
【交付標準】
1. 實驗報告
2. 真實實驗結果
3. 原始圖片
4. 實驗原始數據
5. 剩余物料在周期內可返還（超過周期，不予返還）
康旭禾生物提供包括動物實驗、細胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關的各項服務。
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