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【實(shí)驗(yàn)原理】

代謝組學(xué)實(shí)驗(yàn)的原理是通過(guò)定性鑒別和定量描述生物基質(zhì)中小分子代謝物的表達(dá)與修飾變化，以系統(tǒng)反饋生命體對(duì)自身機(jī)體調(diào)控或外界環(huán)境擾動(dòng)所做出的代謝應(yīng)答。代謝組學(xué)研究的樣本主要包括生物體液和復(fù)雜的生物組織或細(xì)胞樣本。常用的分析鑒定技術(shù)有色譜質(zhì)譜聯(lián)用和核磁共振。

【實(shí)驗(yàn)步驟】

1. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

2. 樣品制備

3. 數(shù)據(jù)采集

4. 數(shù)據(jù)預(yù)處理

5. 多實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)集成/數(shù)據(jù)分析

【常見(jiàn)問(wèn)題與注意事項(xiàng)】

取樣基本原則

代表性和一致性

實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組樣本在取材部位、時(shí)間處理等方面盡可能保持一致，從而保證實(shí)驗(yàn)的可信度；

迅速性

操作過(guò)程迅速，最大限度縮短樣本采集到實(shí)驗(yàn)的時(shí)間；

低溫原則

所有樣本離體后，分離步驟應(yīng)在4℃或冰上進(jìn)行，分離好的樣本立即存于-80℃，以免樣本產(chǎn)生進(jìn)一步代謝活動(dòng)；

血液樣本收集指南

血清：

1）用促凝管（沒(méi)有促凝管則用離心管）收集血液，將促凝管/離心管直立、靜置于試管架上，避免振蕩、摔落；

2）避免陽(yáng)光直射，室溫；

3）檢查凝血完全后，2500 ~ 3000 rpm，4℃ 低速離心5 min，吸取200 μL上清液至1.5 mL離心管中，若上清液較多可每管200 μL、多管分裝，于-80 ℃凍存待用；

4）嚴(yán)禁反復(fù)凍融，如發(fā)生溶血?jiǎng)t該樣本不合格、需重新準(zhǔn)備樣本。合格樣本用干冰運(yùn)輸。

血漿：

1）用抗凝管采血，采血后立刻輕柔上下顛倒8次，使抗凝劑與血液均勻混合（動(dòng)作輕柔，以避免產(chǎn)生溶血）；

2）2500 ~ 3000 rpm，4 ℃低速離心5 min，吸取200 μL上清液分裝至1.5mL離心管中，-80 ℃凍存待用；

3）血液樣本采集后應(yīng)立即把血漿從全血中分離出來(lái)，最晚不遲于采血后1 h內(nèi)分離出血漿。合格樣本用干冰運(yùn)輸。

（1）試管的使用

涉及到RNA等的多組學(xué)實(shí)驗(yàn)取樣，請(qǐng)勿使用肝素鈉抗凝管（對(duì) RNA 相關(guān)實(shí)驗(yàn)有嚴(yán)重影響，抑制反轉(zhuǎn)錄酶活性而導(dǎo)致cDNA量不足）；

核磁實(shí)驗(yàn)（NMR）請(qǐng)勿使用EDTA抗凝管（影響圖譜采譜）；

代謝實(shí)驗(yàn)取樣不建議使用檸檬酸鈉抗凝管（檸檬酸是TCA循環(huán)中的重要物質(zhì)，使用檸檬酸鈉抗凝劑會(huì)引入外源污染），請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況選用合適的抗凝管。

（2）影響因素

取血時(shí)如用酒精消毒，請(qǐng)擦干擦拭部位，待酒精完全揮發(fā)后再取樣；

取血時(shí)如有使用麻醉劑，建議用異氟醚消毒，以避免在譜圖中出現(xiàn)干擾峰。

（3）產(chǎn)率

血清參考產(chǎn)率：30% ~ 50%（例如：1 mL 全血大約能得 0.3 ~ 0.5 mL 血清）。

血漿參考產(chǎn)率：≈ 50 %（例如：1 mL全血大約能得 0.5 mL 血漿）。

采全血時(shí)如使用真空采血管，建議使用促凝管。

（4）凍存管的使用

強(qiáng)烈推薦收集盡量多的樣本并分裝凍存（同批次樣本可以用于多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，且避免反復(fù)凍融而導(dǎo)致結(jié)果不理想），分裝保存時(shí)推薦使用1.5 mL離心管，因?yàn)槁菘趦龃婀苊眱?nèi)有一個(gè)密封用的橡膠墊圈，長(zhǎng)期在-80 ℃/干冰等低溫下，橡膠圈會(huì)變硬脆、易脫落，導(dǎo)致管口密封不嚴(yán)，樣本滲露。

【交付標(biāo)準(zhǔn)】

1. 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 

2. 真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3. 原始圖片

4. 實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)

5. 剩余物料在周期內(nèi)可返還（超過(guò)周期，不予返還）

康旭禾生物提供包括動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、分子實(shí)驗(yàn)、病理實(shí)驗(yàn)、流式檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及論文翻譯、潤(rùn)色、投稿輔助等相關(guān)的各項(xiàng)服務(wù)。

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