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細胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡單，經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。其實驗原理是，當細胞長到融合成單層狀態時，在融合的單層細胞上人為一個空白區域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上，用微量頭或其他硬物在細胞生長的中央區域劃線，去除中央的細胞，然后繼續培養細胞至設定時間（采用無血清或低血清（<2%）排除細胞增殖的影響），取出培養板，觀察周邊細胞是否生長（修復）至中央劃痕區，以此判斷細胞的生長遷移能力。通常設定正常對照組與實驗組，實驗組中添加某些處理因素或藥物、外源性基因等，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力，判斷比較各組細胞的遷移與修復能力。

條件好的實驗室可以使用活細胞成像來分析創傷愈合實驗中角質形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動。結合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關閉和關閉推移時間的速度。使用延時顯微鏡獲取數據的優點是，可以在恒溫箱內確定和穩定的條件下記錄傷口分析。

通常，用于傷口愈合試驗的細胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細胞系和原代細胞經常被用作這方面的模型。蕞常用的細胞類型是角質形成細胞和成纖維細胞。

細胞劃痕實驗步驟：

1、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。

2、 在孔中加入約5×105個細胞，培養細胞至匯合度達到90%以上。

3、用頭比著直尺，垂直于背后的橫線劃痕。

4、 PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，加入無血清培養基。

5、放入37℃ 5% CO2培養箱培養。按0，12，24，48h時間點取樣，100倍鏡下拍照。如果細胞遷移（修復）能力較強，需相應縮短觀察時間間隔。

6、結果分析：對不同時間點不同處理分組的劃痕間距進行分析。

細胞劃痕實驗注意事項：

1. 細胞的密度；劃痕實驗一般是幾種細胞的結合，但是每種細胞的生長速度會不一樣，所以需要按照細胞的生長特性調整培養時間，細胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好，建議是100%的鋪滿。

2. 用槍頭畫線時盡量垂直，以6孔板為例 ，一個孔可以畫6條線

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細胞

4. 注意培養方式一定要改成無血清或者低血清的培養基，因為：劃痕后用無血清培養基培養細胞，意在說明在監測的 24 小時內，劃痕的縮小是細胞 遷移作用的結果，所以要將細胞增殖造成細胞遷移的影響降到蕞低；但若細胞改成無血清培養后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。

5.放入37℃ 5% CO2培養箱，培養。可按0，10，12，15時間點取樣，拍照(具體時間依實驗需要而定)。

6.統計方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條，計算細胞間距離的平均值。