色婷婷六月亚洲6月中文字幕,国产欧洲野花视频WWW,一区二区三区四区无线乱码在线,少妇人人添人人爽人人爽

熱詞搜索

免疫熒光染色之抗體挑選全攻略

瀏覽：160 發表時間：2025-07-01

微信圖片_2025-06-27_155402_376

免疫熒光染色技術依賴于抗原抗體相互作用的極高特異性。通過將不影響抗原抗體功能的熒光染料標記在抗體或抗原上，當標記的抗體與其對應的抗原特異性結合時，可在熒光顯微鏡下觀測到一種特異的熒光信號，從而判定抗原的存在、散布和位置。今天，小編將與大家探討免疫熒光染色中抗體的選擇方法，希望能對大家有所幫助。

免疫熒光染色一抗的挑選

①依據樣本挑選一抗
一抗的物種來源應盡量避免與檢測樣本的物種相同，以防止二抗與樣本內生的免疫球蛋白發生交叉反應。例如，若檢測的是小鼠樣本，那么一抗應避免選用小鼠或大鼠來源，而應考慮如兔來源等其他物種的一抗。這樣，在選擇二抗時便可選用抗兔的二抗，從而規避交叉反應的問題。

②確認抗體檢測目標即為研究目標蛋白
在免疫熒光染色或其他抗體相關的實驗中，由于同一蛋白可能存在多個不同的名稱或同義詞，因此，確保所選抗體的檢測對象與我們研究的目標蛋白完全一致是極為關鍵的。為避免因命名混淆而引發的實驗誤差，一個簡單且有效的方法是通過對比UniProt ID來驗證抗體的特異性。同時，所選抗體的說明書需明確表明適用于免疫熒光實驗，即IF。

如我想對PGC-1α進行標記，我在Abcam搜索PGC1a，找到的結果顯示可進行IF染色，便可選擇，接著我們需考慮物種來源等其他要求。

③確定抗體的反應物種
在選擇一抗時，我們首先要仔細研讀抗體的產品說明書。說明書中會清晰列出抗體的反應物種，即該抗體能夠識別的物種或類別。我們所選的抗體必須能夠識別我們樣本的物種。例如，若樣本是小鼠組織，那么需選用一種能夠識別并結合小鼠組織中小鼠蛋白的一抗。若需進行多種抗體標記，則還需考慮一抗選用不同的物種來源。

④何謂預測可檢測的物種？
在抗體選擇過程中，有時會在產品說明書上看到“預測可與哪些物種反應”（Predicted to react with）這樣的表述。這通常是廠家基于目標蛋白在不同物種間的相似性進行的一種預測，意味著抗體可能能夠識別并結合這些預測物種中的相似蛋白。由于這種預測未經實驗驗證，廠家通常不會為這類抗體的性能提供保證。

免疫熒光染色二抗的挑選

①二抗的物種來源需與一抗相匹配
若一抗是兔來源的，那么應選用識別兔IgG的二抗，即anti-rabbit IgG。

②依據一抗類型與亞類
當一抗是多克隆抗體（多抗），如來源于兔、山羊等，且為IgG同型時，二抗一般選用抗IgG(H+L)的。這是因為多克隆抗體由多個B細胞克隆產生，它們識別的是抗原上的多個表位，且它們的重鏈和輕鏈都可能參與抗原的結合。因此，選用抗IgG(H+L)的二抗可確保與一抗的Fc段（包含重鏈恒定區）以及可能涉及的輕鏈部分均有良好的結合。

當一抗是單克隆抗體（單抗），來源為小鼠IgG1時，可選用Anti-Mouse IgG1的二抗，這樣的二抗僅針對小鼠IgG1的亞類，具有高度的特異性。然而，在某些情況下，為增加實驗的靈活性和兼容性，也可選用anti-mouse IgG(H+L)的二抗。這種二抗能夠識別小鼠IgG的重鏈和輕鏈，因此不僅適用于IgG1亞類，也適用于其他小鼠IgG亞類（如IgG2a、IgG2b等），從而拓寬了其實驗應用范圍。

③熒光染料的選擇
若實驗需進行多重檢測，即同時檢測多個目標，那么需選用光譜不重疊且穩定明亮的熒光染料。這樣可確保每個目標都能被獨立且清晰地檢測到。免疫熒光三標可選用488、555、647。

舉例分析
免疫熒光三標選擇抗體：
①三種一抗物種來源各異，如分別選用來源于豬、小鼠、兔的。

②三種二抗的物種來源最好是相同的，且不同于任何一種一抗，此處便可選用Goat-anti-pig 488、Goat-anti-mouse-555、Goat-anti-rabbit-647。

其他的選擇要求自行判定，免疫熒光多重染色選擇抗體可能較為困難，可考慮采用TSA技術。

補充一下：需明確你的研究對象是何種，是細胞表面的蛋白，還是細胞內的信號分子？不同的抗體針對不同的靶標，需選用正確的抗體。