細胞培養全攻略：從入門到精通，一篇搞定所有關鍵技巧！
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發表時間：2025-07-16
細胞培養是生物醫學研究的核心技術之一，廣泛應用于藥物篩選、基因功能研究、疾病模型構建等領域。然而，細胞培養看似簡單，實則暗藏許多“坑”。本文將為你詳細解析細胞培養的全流程，從基礎操作到高級技巧，助你輕松掌握細胞培養的奧秘！
細胞培養的基礎知識
01
細胞類型
●原代細胞：直接從組織中分離，生物學特性接近體內狀態，但壽命有限。
●細胞系：經過永生化處理，可無限傳代，但可能發生遺傳變異。
●干細胞：具有自我更新和分化潛能，常用于再生醫學研究。
02
培養條件
●培養基：常用DMEM、RPMI-1640，需添加血清（如胎牛血清FBS）和抗生素。
●溫度與氣體：37°C、5% CO?的恒溫培養箱。
●濕度：保持高濕度，防止培養基蒸發。
細胞培養的基本操作
01
無菌操作
●超凈工作臺內操作，使用無菌器材。
●定期消毒工作區域，避免污染。
02
細胞復蘇
●從液氮中取出凍存細胞，迅速放入37°C水浴中解凍。
●將細胞懸液轉移至含培養基的培養瓶中，輕輕混勻后放入培養箱。
03
細胞傳代
●當細胞密度達到80%-90%時進行傳代。
●用PBS洗滌細胞，加入胰酶消化，加入培養基終止消化，離心后重懸細胞并分裝至新培養瓶。
04
細胞凍存
●將細胞懸液與凍存液（含DMSO）混合，分裝至凍存管。
●采用程序降溫法（如-80°C過夜后轉移至液氮）凍存細胞。
細胞培養的常見問題與解決方案
01
污染
●細菌污染：培養基渾濁，pH值迅速下降。解決方法是丟棄污染細胞，徹底消毒工作區域。
●真菌污染：培養基中出現絮狀物。需丟棄污染細胞，清潔培養箱。
●支原體污染：無明顯現象，但影響實驗結果。定期檢測并使用支原體清除劑。
02
細胞生長異常
●生長緩慢：檢查培養基成分、血清質量和細胞狀態。
●細胞死亡：檢查消化時間、培養基pH值和培養條件。
03
細胞形態變化
●形態異常：可能是污染、培養基問題或細胞老化。需重新復蘇細胞或更換培養基。
高級細胞培養技術
01
三維細胞培養
●使用水凝膠或支架模擬體內環境，研究細胞在三維空間中的行為。
02
共培養系統
●將不同細胞類型共同培養，研究細胞間相互作用。
03
基因編輯細胞系
●利用CRISPR/Cas9技術構建基因敲除或敲入細胞系，研究基因功能。
細胞培養的注意事項
01
實驗記錄
●詳細記錄細胞來源、傳代次數、培養基配方和實驗條件。
02
細胞鑒定
●定期進行細胞鑒定（如STR分析），確保細胞系無誤。
03
設備維護
●定期校準培養箱、顯微鏡等設備，確保實驗條件穩定。
細胞培養是生物醫學研究的基礎，掌握其核心技術不僅能提高實驗效率，還能確保實驗結果的可靠性。希望這篇攻略能為你提供實用的指導！如果你有更多問題或經驗分享，歡迎在評論區留言討論！
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