手殘黨福音，小鼠心臟灌流實驗全流程詳解！
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發表時間：2025-07-28
No.1
實驗原理
小鼠心臟灌流實驗，依托血液循環系統，向體循環注入固定液或生理鹽水，以此清除血液并固定組織。該方法可有效消除血液對后續組織切片、免疫染色、基因測序等實驗的干擾，同時維持組織的形態與結構完整性。
No.2
實驗材料
耗材：1mL 注射器、輸液器針頭、止血鉗、鑷子、剪刀、導管，以及眼科鑷、精細剪等解剖工具。
試劑：生理鹽水、4% 多聚甲醛固定液、1.25% 三溴乙醇麻醉劑。
設備：蠕動泵、解剖臺。
No.3
實驗步驟
實驗流程依次為：麻醉小鼠→固定小鼠→打開胸腔→生理鹽水灌流→固定液灌流→組織取材。
麻醉小鼠：精確稱量小鼠體重，按照 0.2mL/10g 的劑量注射 1.25% 三溴乙醇，每只小鼠注射量約 0.6mL。通常在 5 分鐘內可實現完全麻醉，麻醉效果能維持 30 分鐘。
固定小鼠：確認小鼠進入深度麻醉狀態（捏尾尖或腳趾無反應）后，將其四肢的掌根與腳跟部位牢固固定在解剖臺上，防止因小鼠掙扎而導致固定松動。
打開胸腔：先濕潤小鼠腹部毛發，用鑷子提起腹部皮膚，小心剪開腹部（注意避開臟器與腸道），隨后剪開橫隔膜（避免損傷肺臟），再剪斷肋骨，充分暴露心臟。
生理鹽水灌流：剪開右心耳，將輸液器針頭從心尖準確刺入左心室，以 15mL/min 的流速灌注生理鹽水，持續約 3 分鐘。
固定液灌流：觀察到小鼠肝臟和爪子變白，表明血液已清除干凈。此時，再灌注約 1 分鐘生理鹽水后，更換為 4% 多聚甲醛固定液。以 10mL/min 的速度灌注固定液，持續約 5 分鐘。在此過程中，若觀察到小鼠肌肉收縮、尾巴擺動，說明灌流環路通暢。
組織取材：待小鼠肝臟和四肢變硬，即表示灌流完成。小心剪取所需組織，若組織表面有殘留血液，用生理鹽水沖洗干凈，然后轉移至 4% 多聚甲醛固定液中保存。建議保存時間不超過 1 周，以免組織自發熒光增強，影響后續實驗。
No.4
注意事項
進針方向：在左心室進針時，務必確保針頭精準進入左心室，避免刺穿心室間隔進入右心室。
灌流速度：灌流速度不宜過快，防止灌流液流入肺臟，影響實驗效果。
組織保存：灌流后的組織需及時置于 4℃固定液中保存，防止組織降解。實驗過程中應采用體循環，因為肺循環易導致血液殘留，實驗效果不如體循環理想。
附：
體循環路徑：左心室→主動脈→全身各級動脈→毛細血管網→各級靜脈→上、下腔靜脈→右心房
肺循環路徑：右心室→肺動脈→肺部毛細血管網→肺靜脈→左心房
No.5
參考資料
[1] 黃維,楊曉蘭,馬育,等.交聯瓊脂包嵌凹凸棒微囊重復大鼠血液灌流中生物相容性的初探[J].第三軍醫大學學報,2003,(12):1079-1081.
[2] Rana A, Massa PT, Chen XJ. A Gravity-Fed Transcardial Perfusion Method for Histologic Analysis of the Mouse Central Nervous System. J Vis Exp. 2022;(179):10.3791/63386.
主營項目
1. 動物實驗
動物飼養、疾病造模、行為學檢測、心功能、無創血壓、血常規、全自動生化檢測等
2. 細胞實驗
CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉染、穩定株
3. 分子生物學
PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等
4. 蛋白實驗
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實驗
HE染色、免疫組學、電鏡
6. 生理生化實驗
肝腎功能、抗氧化、免疫反應等生理免疫指標;動植物營養指標、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學實驗
基因組、轉錄調控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實驗
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