-
- 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)
- 動(dòng)物飼養(yǎng) 疾病造模 行為學(xué)檢測(cè) 心功能 無創(chuàng)血壓 血常規(guī) 全自動(dòng)生化檢測(cè)等
- 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)
- CCK8/MTT 原代細(xì)胞分離 流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞劃痕 侵襲 遷移 EDU染色 轉(zhuǎn)染 穩(wěn)定株篩選
細(xì)胞如何“愈合”？一文詳解細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)全過程
瀏覽：139
發(fā)表時(shí)間：2025-07-30
今天聊下細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的操作及分析步驟，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Cell scratch assay），也被稱作傷口愈合實(shí)驗(yàn)（Wound healing assay），是一種模擬體內(nèi)傷口愈合過程的體外實(shí)驗(yàn)技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)通過在細(xì)胞單層上制造一個(gè)“劃痕”或“傷口”，并記錄細(xì)胞如何填補(bǔ)這一空白區(qū)域，來研究細(xì)胞的遷移行為、修復(fù)能力以及細(xì)胞間的相互作用。感興趣的小伙伴可以留言交流，加V回復(fù)更快！
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著均勻的劃?rùn)M線，間隔大約0.5-1cm，橫穿過孔，每孔至少穿過5條線；
2 消化細(xì)胞，終止，制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞懸液密度，6孔板每孔鋪5×105左右各細(xì)胞，因?yàn)椴煌?xì)胞的大小以及增殖速度有所不同，故每孔鋪的細(xì)胞量也有所不同，以第二天劃痕之前，細(xì)胞能夠均一的鋪板6孔板底為宜；
3 第二天，用200μL的黃色槍頭，垂直于6孔板底部的橫線進(jìn)行劃痕，槍頭垂直，不要傾斜，最好使用同一槍頭進(jìn)行劃痕；
4 用PBS洗滌3次，去除脫落的細(xì)胞，加入PBS時(shí)動(dòng)作盡量輕柔，防止將其他貼壁細(xì)胞吹起，加入無血清或低血清培養(yǎng)基（若實(shí)驗(yàn)方案中提及需要用藥物刺激，則根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行相應(yīng)的藥物刺激），放入37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案中提供的觀察時(shí)間進(jìn)行觀察、拍照（在劃痕時(shí)會(huì)與6孔板底部形成若干交叉點(diǎn)，可將其作為固定的觀察點(diǎn)，即可解決觀察拍照時(shí)，前后位置不統(tǒng)一的情況）；
5 統(tǒng)計(jì)分析：使用Image J軟件打開圖片后，隨機(jī)劃取6-8條水平線，計(jì)算細(xì)胞間距離的平均值；每個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞整體遷移的距離=每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的距離長(zhǎng)度－0h的距離。
6 統(tǒng)計(jì)分析詳細(xì)步驟：
a. 首先，打開Image J，F(xiàn)ile--Open選擇要分析的圖片,然后 image里面的Type,選擇8-bit。
b . image--adjust--threshold--調(diào)到B&W--背景為白色，劃痕面積為黑色--apply。
c .Anayze--Measure
e . 導(dǎo)出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞整體遷移的距離=每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的距離長(zhǎng)度－0h的距離，分析。
注意事項(xiàng)：
1 輔助劃線：在實(shí)驗(yàn)開始前，使用輔助線幫助確保劃痕的直線性，這有助于后續(xù)的圖像分析。重要的是，在拍照前要清除這些輔助線，以免影響結(jié)果。
2 細(xì)胞接種量：根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)特性和速度來確定接種量，目標(biāo)是在培養(yǎng)過夜后細(xì)胞能夠完全融合，形成無空隙的單層。不均勻的細(xì)胞層可能會(huì)干擾圖像分析和實(shí)驗(yàn)結(jié)論。
3 一致性劃痕：在不同孔中制造劃痕時(shí)，建議使用同一槍頭以減少變異。在劃痕過程中，確保槍頭與細(xì)胞層垂直對(duì)齊，并可參照直尺或孔板蓋來保持力度一致，以確保劃痕的一致性。
4 輕柔沖洗：在沖洗細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作要輕柔，避免對(duì)細(xì)胞層造成破壞。使用貼壁的方式加入緩沖液，并多次重復(fù)以徹底清除細(xì)胞碎片。
5 控制細(xì)胞增殖：為避免細(xì)胞增殖對(duì)遷移結(jié)果的影響，可以采取以下措施：
使用無血清或低血清培養(yǎng)基（低于2%）來降低細(xì)胞增殖。
選擇在細(xì)胞周期內(nèi)（如6、12、24小時(shí)）的合適時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察，避免超過細(xì)胞的一個(gè)生命周期。
如果研究重點(diǎn)僅在于細(xì)胞遷移，可以考慮使用絲裂霉素（1μg/ml）預(yù)處理1小時(shí)以抑制細(xì)胞分裂。
6 劃痕寬度的一致性：確保所有劃痕的寬度一致是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。手工使用槍頭制造劃痕可能難以保證寬度的一致性，這可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。有條件的情況下，推薦使用特定的培養(yǎng)設(shè)備，如culture Insert，它允許在移除Insert后產(chǎn)生固定寬度的劃痕，從而簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)過程并提高結(jié)果的可重復(fù)性。
經(jīng)過上述詳細(xì)的步驟解析，相信您對(duì)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的每一個(gè)細(xì)節(jié)都有了深刻的理解。如果您覺得本文對(duì)您或您的同事、朋友有幫助，請(qǐng)不要猶豫，點(diǎn)擊收藏或轉(zhuǎn)發(fā)，讓更多人受益于這些寶貴的知識(shí)。科學(xué)的進(jìn)步需要我們共同的努力和分享。每一次實(shí)驗(yàn)都可能是通往新發(fā)現(xiàn)的大門。關(guān)注我們的公眾號(hào)，與我們一同科研，歡迎小伙伴分享自己的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。感謝您耐心閱讀到最后，您的支持是我們不斷前行的動(dòng)力。期待在下一次的分享中，我們能為您帶來更多的科學(xué)知識(shí)和實(shí)驗(yàn)技巧。
主營(yíng)項(xiàng)目
1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測(cè)、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測(cè)等
2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株
3. 分子生物學(xué)
PCR檢測(cè)、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長(zhǎng)度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測(cè)等
4. 蛋白實(shí)驗(yàn)
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實(shí)驗(yàn)
HE染色、免疫組學(xué)、電鏡
6. 生理生化實(shí)驗(yàn)
肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)
基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實(shí)驗(yàn)
方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤(rùn)色、協(xié)助投稿
聯(lián)系我們
康旭禾生物提供包括動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、分子實(shí)驗(yàn)、病理實(shí)驗(yàn)、流式檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及論文翻譯、潤(rùn)色、投稿輔助等相關(guān)的各項(xiàng)服務(wù)。
聯(lián)系方式：15579126092
公司官網(wǎng)：http://consurebio.com/
公司地址：江西省南昌市南昌縣小藍(lán)VR產(chǎn)業(yè)基地D座2樓
點(diǎn)擊右上角
分享給朋友吧
長(zhǎng)按圖片保存/分享
139
電話：19379182007
郵箱：sale@consurebio.com
QQ：3954404680
地址：南京市鼓樓區(qū)新河一村11號(hào)4幢1486室
實(shí)驗(yàn)室地址：江西省南昌市南昌縣小藍(lán)VR產(chǎn)業(yè)基地D座2樓
科研服務(wù)
科研產(chǎn)品
微信公眾號(hào)
微信視頻號(hào)
版權(quán)所有：南京康旭禾生物科技有限公司 蘇ICP備2021044455號(hào)-1
在線咨詢
聯(lián)系方式
聯(lián)系電話
19379182007
聯(lián)系電話
15579155056
掃一掃二維碼
