親愛的科研同仁們,今日我們來深入探討生物醫(yī)學領(lǐng)域里四個易混淆的概念:轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導、轉(zhuǎn)染及感染。盡管它們聽似相近,實則內(nèi)涵及應(yīng)用背景大相徑庭。接下來,我將逐一剖析它們的差異。
轉(zhuǎn)化(Transformation)
定義:于分子克隆領(lǐng)域,轉(zhuǎn)化專指將質(zhì)粒DNA或以其為載體的重組子直接引入細菌細胞的過程。
分類:①染色體DNA轉(zhuǎn)化:歷經(jīng)吸附、吸收、整合三階段。DNA一旦被細胞攝取,即免受外源核酸酶分解。它初為雙鏈,入胞后轉(zhuǎn)單鏈,整合至細菌染色體。②質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化:先以特定濃度鈣離子預處理大腸桿菌,制備感受態(tài),隨后轉(zhuǎn)化。此法效率優(yōu)于染色體DNA轉(zhuǎn)化。
應(yīng)用:轉(zhuǎn)化作為基因工程的關(guān)鍵技術(shù)(參見重組DNA技術(shù)),亦可能為作物育種及遺傳病的基因治療開辟新徑。
(轉(zhuǎn)化示意圖)
轉(zhuǎn)導(Transduction)
定義:分子克隆范疇內(nèi),轉(zhuǎn)導專指利用噬菌體DNA作為媒介,將外源性DNA運送進細菌細胞的過程。
分類:
①普遍性轉(zhuǎn)導:此類型中,噬菌體具備傳遞供體細菌任意基因的能力。例如,鼠傷寒沙門氏菌的P22、大腸桿菌的P1、枯草桿菌的PBS1、PBS2及SP10噬菌體,均屬普遍性轉(zhuǎn)導噬菌體。
②局限性轉(zhuǎn)導:此情形下,噬菌體僅能傳遞供體染色體上緊鄰原噬菌體整合位點的基因。大腸桿菌K-12的λ噬菌體與φ80噬菌體,即為局限性轉(zhuǎn)導噬菌體的代表。
應(yīng)用:轉(zhuǎn)導在細菌遺傳學研究中扮演重要角色,作為常用研究工具,它可實現(xiàn)細菌間基因的轉(zhuǎn)移,便于進行互補測試、基因定位,尤其是通過共轉(zhuǎn)導技術(shù)深入分析基因的精細結(jié)構(gòu)。在遺傳工程中,借助重組DNA技術(shù),目標基因可被插入λ噬菌體DNA,隨后通過體外包裝技術(shù),利用噬菌體外殼蛋白封裝,最終感染宿主細胞,用于構(gòu)建基因文庫。
(轉(zhuǎn)導示意圖)
轉(zhuǎn)染(Transfection)
定義:于分子克隆領(lǐng)域,轉(zhuǎn)染專指將外源性基因?qū)氩溉閯游锛毎囊幌盗屑夹g(shù)統(tǒng)稱。
分類:
①瞬時轉(zhuǎn)染:此過程中,外源DNA/RNA并不整合至宿主染色體,故單一宿主細胞內(nèi)可含多個拷貝,實現(xiàn)高表達水平,但持續(xù)時間有限,通常僅數(shù)日,主要應(yīng)用于啟動子及調(diào)控元件的研究。
②穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:外源DNA可整合入宿主染色體或作為游離態(tài)存在。
轉(zhuǎn)染手段:
①化學法:涵蓋DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法及人工脂質(zhì)體法等;
②物理法:包括顯微注射、電穿孔技術(shù)以及基因槍等。
(轉(zhuǎn)染示意圖)
感染(Infection)
定義:感染,作為醫(yī)學術(shù)語,通常描述的是病原微生物(涵蓋細菌、真菌、病毒等)侵入生物體并引發(fā)的病理生理反應(yīng)過程。
應(yīng)用實例:基于病毒能侵入人體并復制增殖的特性,科學家對病毒DNA進行改造,使其成為攜帶外源基因的載體。1990年,美國科學家率先利用反轉(zhuǎn)錄病毒作為載體,成功將腺苷脫氨酶基因(ada)導入患者自身的T淋巴細胞,經(jīng)過擴增后回輸給患者,這一里程碑式的成就開啟了基因治療的新紀元。
(感染示意圖)
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