【動物實驗】不同血友病模型對比及案例分析！
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發表時間：2025-08-05
模型差異總結
模型優缺點與應用場景
模型構建案例
1. 實驗方法
① 基因敲除（Knockout）
技術：CRISPR/Cas9或同源重組靶向刪除特定外顯子（如F8 exon 16/17）。
應用：小鼠血友病A/B型。
② 轉基因（Transgenic）
技術：顯微注射人類突變基因（如R539C、HLAD28/1*1501）至胚胎干細胞或受精卵。
應用：模擬人類錯義突變。
③ 敲入（Knock-in）
技術：靶向插入特定突變（如R33Q、G581E）至內源基因位點，保留表達框架。
應用：研究CRM+/-表型。
④ 自然突變模型
技術：篩選自然發生的突變個體（如犬外顯子22倒位）。
應用：犬血友病A型（Graham等, 1949；Hough等, 2002）。
2. 實驗材料
動物品系：小鼠：C57BL6、BALB/c、C3H等近交系；犬：Chapel Hill、Queen品系。
基因工具：CRISPR/Cas9系統、重組載體、胚胎干細胞（傳統方法）。
突變類型：外顯子倒位、錯義突變（R539C）、提前終止密碼子。
3. 造模后驗證與檢測
3.1 病理檢測
① 凝血功能評估：
APTT（活化部分凝血活酶時間）：顯著延長（正常值：25-35秒；模型可達>60秒）。
凝血因子活性（FVIII:C/FIX:C）：ELISA或發色底物法檢測，重型模型活性<1%。
② 出血表型觀察：
尾部出血時間：小鼠>10分鐘（正常<2分鐘）。
自發性出血：關節腫脹（犬模型）、肌肉血腫（綿羊模型）。
3.2 分子蛋白檢測
① 基因型驗證：
PCR擴增+Sanger測序：確認外顯子敲除或突變位點（如L176P）。
Southern blot：用于大片段缺失或倒位檢測（如犬外顯子22倒位）。
② 蛋白表達分析：
Western blot：檢測FVIII/FIX蛋白缺失（敲除模型）或異常大?。ㄍ蛔兡Ｐ停?。
ELISA：定量血漿凝血因子水平（CRM+模型可能顯示正?？乖珶o活性）。
③ CRM狀態鑒定：
交叉反應抗體：CRM+（蛋白存在但無功能，如R33Q）；CRM-（蛋白完全缺失，如G379E）。
注意事項
1. 品系選擇：C57BL6小鼠免疫耐受性強，適合基因治療；BALB/c易產生抗體，適合免疫研究。
2. CRM分類：CRM+模型需結合功能實驗（如凝血活性檢測）明確表型。
3. 自然突變模型：犬外顯子22倒位與人類重型血友病A高度相似，是金標準模型。
通過系統選擇模型，可針對不同研究目標（機制探索、治療開發、長期安全性）優化實驗設計。
主營項目
1. 動物實驗
動物飼養、疾病造模、行為學檢測、心功能、無創血壓、血常規、全自動生化檢測等
2. 細胞實驗
CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉染、穩定株
3. 分子生物學
PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等
4. 蛋白實驗
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實驗
HE染色、免疫組學、電鏡
6. 生理生化實驗
肝腎功能、抗氧化、免疫反應等生理免疫指標;動植物營養指標、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學實驗
基因組、轉錄調控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實驗
方案設計、整體實驗交付、標書寫作、論文潤色、協助投稿
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康旭禾生物提供包括動物實驗、細胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關的各項服務。
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