細胞實驗 ▏細胞凋亡之Hoechst染色實驗
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發表時間：2025-08-08
細胞凋亡之Hoechst染色實驗
細胞凋亡是指為維持內環境穩定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。
實驗原理
Hoechst 33258和Hoechst 33342均為非嵌入性熒光染料，它們在活細胞中DNA聚AT序列富集區域的小溝處與DNA結合。活細胞或固定細胞均可從低濃度溶液中攝取該染料，從而使細胞核著色，故又把此類染料稱為DNA探針。Hoechst 33342和Hoechst 33258均可溶于水并在水溶液中保持穩定。Hoechst-DNA的激發和發射波長分別550 nm和460 nm。在熒光顯微鏡紫外光激發時，Hoechst-DNA發出亮藍色熒光。Hoechst染色是熒光染色中的一種類型，專門用來在熒光顯微觀察下標示DNA，由于可將DNA標示，此種染色方式也可以用來辨識內含DNA的細胞核及線粒體的位置。
實驗步驟?
（1）取處理后的各組樣本，加入1 mL 4％多聚甲醛室溫固定20 min，棄去固定液，加入1 mL PBS清洗兩次，每次3 min，棄去PBS；
（2）加入1 mL Hoechst 33258染色液，室溫染色5 min；
（3）棄掉染色液用PBS清洗五遍，每次3 min，最后加入1 mL PBS；
（4）熒光顯微鏡下觀察并拍照。
凋亡的細胞核染色增強，熒光更為明亮，呈圓狀或固縮狀、團塊狀結構。非凋亡細胞核呈熒光深淺不一的結構樣特征。二者形態相異，易區分辨別。
注意事項
Hoechst染色液需避光保存。
加入工作液后盡量當天完成拍攝避免染料淬滅影響。
如有需要，請聯系我們~
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