一文拯救 WB 實驗！Western blot 內參選擇避坑全攻略
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發表時間：2025-09-04
一、常見的內參抗體
1.β-actin（42 kDa）
特點：β-actin 是細胞骨架的重要組成部分，廣泛存在于大多數細胞和組織中，其表達相對穩定，且與眾多目標蛋白的分子量差異較大，便于在 Western blot 實驗中區分。
局限性：在肌肉組織中，β-actin 的高表達可能影響內參的準確性。此外，其聚合狀態易受細胞信號轉導的影響，從而導致表達水平發生變化。因此，在肌肉組織相關研究或涉及細胞信號轉導的實驗中，建議優先選擇其他內參抗體，如 GAPDH 或 β-tubulin。
2.GAPDH（36 kDa）
特點：GAPDH 參與糖酵解等代謝過程，其在多數細胞和組織中表達較為穩定，且與多數目標蛋白的分子量差異較大，便于在 Western blot 實驗中區分。此外，GAPDH 的價格適中，是常用的內參抗體之一。
局限性：在特定條件下，如缺氧等，GAPDH 的表達可能會發生改變。此外，若研究涉及糖代謝相關領域，GAPDH 的表達變化可能會影響內參的準確性。在這種情況下，建議選擇 β-actin 作為替代內參抗體。
3.β-tubulin（55 kDa）
特點：β-tubulin 是細胞微管結構的重要組成部分，其表達相對穩定，能夠與不同分子量的目標蛋白區分，適用于細胞骨架相關研究。
局限性：β-tubulin 的穩定性可能受到藥物處理或細胞生理狀態的影響。在某些特殊細胞類型或疾病模型中，其表達可能不穩定。因此，在這些情況下，GAPDH 可能是更好的選擇。
二、如何選擇內參抗體
1.目的蛋白分子量大小
在選擇內參抗體時，應確保目的蛋白與內參蛋白的分子量相差至少5 kDa，以避免在Western blot實驗中出現條帶重疊，從而確保實驗結果的準確性和可讀性。
2.目的蛋白的細胞定位
①胞漿和全細胞蛋白：可選擇β-actin（42 kDa）、GAPDH或β-tubulin。其中，β-actin在胞漿中表達高效且穩定，但理論上在細胞核內不表達，因此不能作為核蛋白的內參。
②胞核蛋白：可選擇PCNA（GB12010）、Histone H3（GB11102）等，這些蛋白在細胞核中表達穩定，適合作為核蛋白的內參。
③核膜蛋白：可選擇Lamin B1（GB111802），其在核膜中表達穩定，適合作為核膜蛋白的內參。
④線粒體蛋白：可選擇COXIV（GB11250）、VDAC1（GB121939）等，這些蛋白在線粒體中表達穩定，適合作為線粒體蛋白的內參。
3.組織特異性
在脂肪組織中，β-actin的表達量較低，不適合作為內參抗體。
在腦組織中，β-tubulin的表達較高，而β-actin的表達量可能較低，因此建議選擇β-tubulin作為內參。
在骨骼肌、心肌和平滑肌中，β-tubulin的表達可能發生變化或特化，而GAPDH的表達相對穩定，因此建議選擇GAPDH作為內參。
不同組織和細胞類型對內參蛋白的適用性存在差異。例如：
對于其他來源的樣本，如果研究較少，建議參考相關文獻報道，選擇合適的內參蛋白。
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