裸鼠,也被稱為無胸腺裸鼠,是一種先天性胸腺缺陷的突變小鼠,其形成源于第VIII連鎖群內(nèi)裸體位點(diǎn)基因的純合。
裸鼠在科學(xué)研究中展現(xiàn)出巨大的潛力,這主要?dú)w功于其nu基因獨(dú)特的遺傳特性。經(jīng)過全球?qū)嶒?yàn)動(dòng)物遺傳育種學(xué)家的不懈努力,nu基因已被成功導(dǎo)入不同近交系動(dòng)物中,從而創(chuàng)建了一系列動(dòng)物模型。僅小鼠模型一種,就已建立了二十余種近交系裸鼠。
這些裸鼠具有不同的遺傳背景和nu基因的遺傳特性,為醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究者提供了一種極其寶貴的試驗(yàn)材料。本文將重點(diǎn)探討裸鼠的成瘤實(shí)驗(yàn)方法。
常見的成瘤細(xì)胞
常見的易成瘤細(xì)胞:Hep-G2(肝癌)、Hep2(喉癌)、NCI-H460(大細(xì)胞肺癌)、A431(表皮癌)、SK-OV-3(卵巢癌)、MCF-7(乳腺癌)、SKBR3、A375/B16-F10(人黑色素瘤細(xì)胞)、SGC7901(人胃腫瘤細(xì)胞)以及KB(人口腔表皮樣癌細(xì)胞)。
成瘤速度較慢的細(xì)胞:CNE(鼻咽癌)、A549(肺癌)、SPC-A-1(肺腺癌)、HT-29(結(jié)腸癌)、BEL-7402(肝癌)、MDA-MB-231(乳腺癌)、CT26(小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞)、SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)、U251(人膠質(zhì)瘤細(xì)胞)、BGC-823(人胃癌細(xì)胞)以及PC-3(人前列腺癌細(xì)胞)。
一些具有爭議的細(xì)胞:Hela(宮頸癌)、HCT(人回盲腸癌細(xì)胞/人結(jié)直腸癌腺癌細(xì)胞)。其他常用的細(xì)胞還包括BMSC(骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)。
裸鼠成瘤小技巧
1、裸鼠的選擇:實(shí)驗(yàn)室常用的是BALB/c-nu裸小鼠。由于裸小鼠體內(nèi)正常T細(xì)胞可能隨年齡增長或受病毒感染等因素而增加,因此接種腫瘤實(shí)驗(yàn)一般采用4-6周齡的裸鼠。
2、細(xì)胞狀態(tài):細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。應(yīng)取處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞,細(xì)胞密度達(dá)到80-90%為宜。在收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞處理:胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍,以去除細(xì)胞中殘余的血清。然后用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度。一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支,接種體積為0.1-0.2ml。有條件的實(shí)驗(yàn)室也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成。
4、接種技巧:細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下,一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成。接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散,防止細(xì)胞成團(tuán)。接種時(shí),針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn),約1cm深,針頭在皮下左右滑動(dòng)幾次,以便細(xì)胞接種成團(tuán)。
5、保定裸鼠技巧:左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚,小拇指夾住裸鼠尾巴。
6、腫瘤觀察與測量:接種后1-2周左右可以見到皮下開始出現(xiàn)腫塊。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量,一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤大小測量一般為1周兩次,使用游標(biāo)卡尺測量腫瘤最長和最短部位,并計(jì)算體積。
裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)疑難解答
問:為什么選擇裸鼠而不是普通老鼠或小白鼠?
答:裸鼠最大的特點(diǎn)是沒有胸腺等免疫器官,免疫力幾乎為零,對(duì)腫瘤細(xì)胞沒有免疫作用,因此易于成瘤。
問:瘤塊長起來又消失是怎么回事?
答:這可能是炎癥反應(yīng)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收。建議繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否能在幾周內(nèi)重新長出。如果長不起來,建議更換裸鼠。
問:是否可以在一只小鼠上進(jìn)行多個(gè)點(diǎn)接種?
答:不可以。因?yàn)槎鄠€(gè)腫瘤塊可能會(huì)相互影響。
問:腫瘤長不出來是怎么回事?
答:可能的原因包括腫瘤生長周期慢、細(xì)胞狀態(tài)差或不易成瘤、小鼠周齡太大或存在免疫排斥等。建議根據(jù)具體情況調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件或更換細(xì)胞系、小鼠品種。
問:腫瘤體積相差很大、大小不一是怎么回事?
答:這可能跟小鼠周齡及接種細(xì)胞量不一致導(dǎo)致。建議重新接種以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性。
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主營項(xiàng)目
1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測等
2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株
3. 分子生物學(xué)
PCR檢測、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等
4. 蛋白實(shí)驗(yàn)
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實(shí)驗(yàn)
HE染色、免疫組學(xué)、電鏡
6. 生理生化實(shí)驗(yàn)
肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)
基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實(shí)驗(yàn)
方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿
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