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動物實驗| 大鼠腦中動脈缺血再灌注模型構建方法分享

瀏覽：124 發(fā)表時間：2025-07-22

缺血性腦卒中是一種嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其中組織損傷是導致死亡的主要原因。近年來的研究表明，缺血后的再灌注過程中產(chǎn)生的過量氧自由基在組織損傷中起著關鍵作用。因此，研究腦缺血再灌注損傷的作用機制已成為全球科學界的關注焦點。在眾多研究方法中，線栓法因其操作簡便、無需開顱、無需呼吸機輔助等優(yōu)點，成為構建腦局部缺血再灌注損傷模型的首選方法。該方法能夠精確控制缺血及再灌注的時間，并且對局部條件的控制較為容易，對全身的影響較小，是制作腦局部缺血再灌注損傷模型的理想選擇。

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本實驗旨在通過線栓法復制大鼠大腦中動脈缺血再灌注（Middle Cerebral Artery Ischemia/Reperfusion，MCAO/R）損傷模型。通過在再灌注后的不同時間點處死大鼠，本研究將探討該模型制作方法的成功率、穩(wěn)定性以及再灌注后不同時間點腦梗死體積的變化。這將為深入理解腦缺血再灌注損傷的病理機制提供重要的實驗依據(jù)，并為開發(fā)新的治療策略奠定基礎。

01實驗動物

雄性SD大鼠，體質量250～280g

02造模過程

1. 麻醉

采用異氟烷對大鼠進行吸入麻醉，調整異氟烷濃度以維持適宜的麻醉深度，確保大鼠在手術過程中無痛感且生命體征穩(wěn)定。

2. 手術切口與血管暴露

■ 在大鼠頸部進行正中切口，剪開皮膚，分離皮下軟組織，暴露頸動脈鞘。

■ 仔細分離右側頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內動脈（ICA）。

3. 血管操作與栓塞放置

■在枕動脈以上結扎ECA，并在ECA靠近分叉處放置一備用線。

■使用動脈夾分別夾閉ICA和CCA。

■電凝刀離斷枕動脈及ECA遠心端，在ECA上剪一缺口，將備好的栓線經(jīng)ECA插入ICA至栓線頭部達到MCA起始處，用備用線打結固定栓線。

4. 血流恢復與傷口處理

■取下ICA、CCA的動脈夾，恢復血流。

■清理創(chuàng)口并縫合肌肉及皮膚，傷口消毒后局部使用抗生素預防感染。

5. 缺血再灌注操作

■在缺血2小時后拔出栓線，形成大鼠腦缺血再灌注損傷。

6. 假手術組處理

■假手術組大鼠與MCAO/R組操作步驟前部分相同，但不進行栓線插入操作。

7. 術后護理

■手術后將動物回籠飼養(yǎng)，密切觀察其恢復情況，確保動物福利。

造模成功標準：大鼠清醒后1h，依照Longa5級4分制神經(jīng)學評分原則對大鼠行為進行評分。Longa5級4分制評分原則：

① 0分，正常，無神經(jīng)系統(tǒng)異常的體征。

② 1分，不能完全伸展病變對側上肢。

③ 2分，行走時向對側旋轉。

④ 3分，行走時向對側傾倒。

⑤ 4分，無自發(fā)活動伴意識降低。

得1-4分者為成功模型。術中意外死亡、再灌注24h內死亡、蛛網(wǎng)膜下腔出血的大鼠被剔除。

03實驗結果

C1：假手術組

C2：改良模型組

白色為梗死區(qū)域，紅色為正常區(qū)域

假手術組大鼠冠狀切面左右腦半球染色均勻、對稱，灰質呈紅色，白質呈淺紅或瓷白色，無呈蒼白色的梗死區(qū)(圖C1)。模型組大鼠腦組織缺血側可見皮質和(或)皮質下呈蒼白色的梗死區(qū)域，包括基底核的外側、頂葉和顳葉皮質、海馬、紋狀體等區(qū)域，與對側半球呈紅色的正常腦組織對比鮮明，白色區(qū)與紅色區(qū)域之間界限不明顯(圖C2)。

參考文獻-孫念霞,高維娟,易忠良.改良線栓法制作SD大鼠局灶性腦缺血再灌注模型[J].中國組織工程研究,2014,18(02):225-230.

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