動物實(shí)驗(yàn)| 大鼠腦中動脈缺血再灌注模型構(gòu)建方法分享
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發(fā)表時(shí)間：2025-07-22
缺血性腦卒中是一種嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其中組織損傷是導(dǎo)致死亡的主要原因。近年來的研究表明，缺血后的再灌注過程中產(chǎn)生的過量氧自由基在組織損傷中起著關(guān)鍵作用。因此，研究腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制已成為全球科學(xué)界的關(guān)注焦點(diǎn)。在眾多研究方法中，線栓法因其操作簡便、無需開顱、無需呼吸機(jī)輔助等優(yōu)點(diǎn)，成為構(gòu)建腦局部缺血再灌注損傷模型的首選方法。該方法能夠精確控制缺血及再灌注的時(shí)間，并且對局部條件的控制較為容易，對全身的影響較小，是制作腦局部缺血再灌注損傷模型的理想選擇。
本實(shí)驗(yàn)旨在通過線栓法復(fù)制大鼠大腦中動脈缺血再灌注（Middle Cerebral Artery Ischemia/Reperfusion，MCAO/R）損傷模型。通過在再灌注后的不同時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，本研究將探討該模型制作方法的成功率、穩(wěn)定性以及再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)腦梗死體積的變化。這將為深入理解腦缺血再灌注損傷的病理機(jī)制提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為開發(fā)新的治療策略奠定基礎(chǔ)。
01實(shí)驗(yàn)動物
雄性SD大鼠，體質(zhì)量250～280g
02造模過程
1. 麻醉
采用異氟烷對大鼠進(jìn)行吸入麻醉，調(diào)整異氟烷濃度以維持適宜的麻醉深度，確保大鼠在手術(shù)過程中無痛感且生命體征穩(wěn)定。
2. 手術(shù)切口與血管暴露
■ 在大鼠頸部進(jìn)行正中切口，剪開皮膚，分離皮下軟組織，暴露頸動脈鞘。
■ 仔細(xì)分離右側(cè)頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內(nèi)動脈（ICA）。
3. 血管操作與栓塞放置
■在枕動脈以上結(jié)扎ECA，并在ECA靠近分叉處放置一備用線。
■使用動脈夾分別夾閉ICA和CCA。
■電凝刀離斷枕動脈及ECA遠(yuǎn)心端，在ECA上剪一缺口，將備好的栓線經(jīng)ECA插入ICA至栓線頭部達(dá)到MCA起始處，用備用線打結(jié)固定栓線。
4. 血流恢復(fù)與傷口處理
■取下ICA、CCA的動脈夾，恢復(fù)血流。
■清理創(chuàng)口并縫合肌肉及皮膚，傷口消毒后局部使用抗生素預(yù)防感染。
5. 缺血再灌注操作
■在缺血2小時(shí)后拔出栓線，形成大鼠腦缺血再灌注損傷。
6. 假手術(shù)組處理
■假手術(shù)組大鼠與MCAO/R組操作步驟前部分相同，但不進(jìn)行栓線插入操作。
7. 術(shù)后護(hù)理
■手術(shù)后將動物回籠飼養(yǎng)，密切觀察其恢復(fù)情況，確保動物福利。
造模成功標(biāo)準(zhǔn)：大鼠清醒后1h，依照Longa5級4分制神經(jīng)學(xué)評分原則對大鼠行為進(jìn)行評分。Longa5級4分制評分原則：
① 0分，正常，無神經(jīng)系統(tǒng)異常的體征。
② 1分，不能完全伸展病變對側(cè)上肢。
③ 2分，行走時(shí)向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)。
④ 3分，行走時(shí)向?qū)?cè)傾倒。
⑤ 4分，無自發(fā)活動伴意識降低。
得1-4分者為成功模型。術(shù)中意外死亡、再灌注24h內(nèi)死亡、蛛網(wǎng)膜下腔出血的大鼠被剔除。
03實(shí)驗(yàn)結(jié)果
C1：假手術(shù)組
C2：改良模型組
白色為梗死區(qū)域，紅色為正常區(qū)域
假手術(shù)組大鼠冠狀切面左右腦半球染色均勻、對稱，灰質(zhì)呈紅色，白質(zhì)呈淺紅或瓷白色，無呈蒼白色的梗死區(qū)(圖C1)。模型組大鼠腦組織缺血側(cè)可見皮質(zhì)和(或)皮質(zhì)下呈蒼白色的梗死區(qū)域，包括基底核的外側(cè)、頂葉和顳葉皮質(zhì)、海馬、紋狀體等區(qū)域，與對側(cè)半球呈紅色的正常腦組織對比鮮明，白色區(qū)與紅色區(qū)域之間界限不明顯(圖C2)。
參考文獻(xiàn)-孫念霞,高維娟,易忠良.改良線栓法制作SD大鼠局灶性腦缺血再灌注模型[J].中國組織工程研究,2014,18(02):225-230.
(1)圖A為假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)各層細(xì)胞排列規(guī)則、整齊，神經(jīng)突起自然排列，胞質(zhì)內(nèi)尼氏體為紫藍(lán)色顆粒或塊狀結(jié)構(gòu)，核圓形或橢圓形居中，核仁圓形居中，間質(zhì)均勻、淡染。
(2)圖B為模型組術(shù)側(cè)海馬區(qū)各層細(xì)胞排列紊亂，部分神經(jīng)細(xì)胞消失，殘存神經(jīng)細(xì)胞胞膜皺縮內(nèi)陷，神經(jīng)纖維異常彎曲，胞質(zhì)內(nèi)尼氏體消失、淡染、模糊，核固縮均質(zhì)化，核仁不規(guī)則、易位。
參考文獻(xiàn)-孫念霞,高維娟,易忠良.改良線栓法制作SD大鼠局灶性腦缺血再灌注模型[J].中國組織工程研究,2014,18(02):225-230.
參考文獻(xiàn)：
[1]孫念霞,高維娟,易忠良.改良線栓法制作SD大鼠局灶性腦缺血再灌注模型[J].中國組織工程研究,2014,18(02):225-230.
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主營項(xiàng)目
1. 動物實(shí)驗(yàn)
動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等
2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株
3. 分子生物學(xué)
PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等
4. 蛋白實(shí)驗(yàn)
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實(shí)驗(yàn)
HE染色、免疫組學(xué)、電鏡
6. 生理生化實(shí)驗(yàn)
肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)
基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實(shí)驗(yàn)
方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿
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