一、動物實驗基本方法指南
1、動物實驗給藥劑量計算方法
2、動物實驗常用給藥方式
1、皮下注射。捏起皮膚,刺入針頭,固定后即可注射
2、皮內注射。剪掉注射部位動物毛發,消毒,用皮試針頭緊貼皮膚表層刺入皮內,針頭上挑再稍刺入
3、肌肉注射。適合不溶于水而混懸狀態的藥物。選擇肌肉發達、無大血管經過的部位,如臀部
4、腹腔注射。腹部消毒,在左或右側腹部將針頭刺入皮下,沿皮下向前推進0.5CM,針頭與皮膚45度角方向穿過腹肌刺入腹腔,此時應有落空感,回抽無腸液、尿液后,緩緩推入藥液。多用大鼠小鼠
5、靜脈注射。尾靜脈注射(大鼠小鼠),前肢皮下靜脈注射(豚鼠),耳緣靜脈注射(兔)
6、淋巴囊注射。蛙類常采用此法,多選腹部淋巴囊,從大腿上端刺入,進入腹壁肌層,再進入腹壁皮下
7、灌胃法。灌胃針深度:3-4cm(小鼠),4-6cm(大鼠/豚鼠),灌胃量:0.2-1ML小鼠,1-4ml大鼠。
3、動物實驗藥品劑型的配置
在動物實驗中藥物應該優先選擇純粉(原料藥),可以排除輔料的干擾劑量設計更加靈活。需要使用溶劑、助溶劑將藥物配制成一定的劑型后給動物使用。優先選擇無毒性、與藥物無反應的溶劑。
1、水溶性藥物配制。選用溶劑為純水、或者生理鹽水等水系溶劑,注射前建議微膜過濾除菌
2、水不溶或者難溶藥物(脂溶性)配制。可以嘗試使用植物油類,如大豆油、蓖麻油,橄欖油作為溶劑,或者添加助溶劑,如2%吐溫-80,PEG400,丙二醇,泊洛沙姆,0.5%CMC-NA,10%Solutolβ-環狀糊精,羥丙基β-環狀糊精,甘油。如確實需要使用DMSO,請確保DMSO終濃度<5%。不建議使用乙醇、甲醇等有機溶劑。灌胃,混懸狀態也可。
二、動物麻醉劑
1、水合氯醛;Chloral hydrate
純度:>99%
溶解性:water>10mg/ml
常用濃度:5-10%,給藥劑量300mg/kg(動物體重);給藥方式腹腔注射:因具體動物情況不同,需要根據自己實驗條件進行模式,信息僅供參考。
特點:麻醉較淺,麻醉持續時間較長,對鼠、兔肌肉松弛效果一般,可與烏拉坦合用,增強效果。
2、烏拉坦:烏來糖;尿烷 Ethy carbamate
純度:>99%溶解性:溶于水特點:麻醉持續時間2小時左右,多用于鼠和兔的麻醉,腹腔注射,或者耳緣靜脈(免)。常用劑量為1000mg/KG(體重),使用濃度20%,肌肉松弛效果較好,作用溫和,可用于深度麻醉。
3、乙酰丙嗪 Acepromazine maleate
純度:>98%溶解性:水>10mg/MI特點:常用于大型動物如犬和貓的輔助麻醉,肌肉注射,給藥劑量0.1mg/kg(體重)
4、a-氯醛糖 a-Chloralose
總含量>98%溶于乙醇,微溶于水特點:a-氯醛糖在動物實驗中可用做麻醉劑,常用劑量50-80mg/kg,麻醉時間可達5-6小時。麻醉時間持續時間長,對心血管和呼吸系統抑制輕,但是麻醉淺,鎮痛效果不佳,常伴有不自主興奮
5、鹽酸氯丙嗪,Chlorpromazine HCl
純度:>98%溶解性:水>50mg/ml特點:可輔助增強麻醉效果,起鎮定作用,腹腔注射,劑量3-5mg/kg(體重)
6、三溴乙醇(阿佛丁),2,2,2-Tribromoethanol
配制:將本產品和叔戊醇,混合以制備原液,三溴乙醇體積占66.7%,得到三溴乙醇濃度為1g/mL的母液:該母液應避光保存在冰箱中。施行麻醉前配置新鮮工作液,用后處理掉。文獻中描述的大多數溶解在叔戊醇中的三溴乙醇含有無菌生理鹽水。該工作液必須加熱至溶解,加熱時注意溫度不要超過40度。
注射前配制:滅菌的磷酸鹽緩沖液參考劑量(小鼠):200mg/kg給藥處理:腹膜腔內注射
三、動物模型類型
1、心血管疾病動物模型
1、動脈粥樣硬化(Atherosclerosis)動物模型
病理指標:血管內皮細胞活化,單核細胞黏附遷移至內膜下,巨噬細胞吞噬氧化修飾的脂蛋白轉化為泡沫細胞、內膜中膜增生,最終形成粥樣斑塊或引起血管堵塞。
2、高脂肪血動物模型(hyperlipidemia)
病理指標:血液中總膽固醇或/和甘油三酯過高
3、高血壓動物模型(Hypertension)
病理指標 :大鼠采用尾容積法測定清醒狀態下大鼠的間接血壓(收縮壓)。血壓在85~115mmHg范圍為正常血壓大鼠;各種造型處理后凡血壓比處理前高20mmHg以上且高于115mmHg
2、消化系統疾病模型
常見的消化系統疾病模型種類有,慢性萎縮性胃炎,胃潰瘍,十二指腸潰瘍,胃癌,胰腺炎,結腸炎等
3、糖尿病動物模型
糖尿病diabetes;DM疾病簡介:糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物作用受損,或兩者兼有引起。疾病常見分型如下:
|型糖尿病(胰島素依賴型)diabetes mellitustype1(insulin-dependent diabetes melitus;IDDM)1型糖尿病患者需依賴注射胰島素存活。
2型糖尿病(非胰島素依賴型)diabetes mellitus,type2(Noninsulin-dependent diabetes mellitusNIDDM)這一類型的糖尿病患者占總數的80%~90%。2型糖尿病原名叫成人發病型糖尿病
四、癌癥誘導劑
利用化學因素引起細胞遺傳性特異異常,可以制備動物腫瘤模型。
主營項目
1. 動物實驗
動物飼養、疾病造模、行為學檢測、心功能、無創血壓、血常規、全自動生化檢測等
2. 細胞實驗
CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉染、穩定株
3. 分子生物學
PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等
4. 蛋白實驗
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實驗
HE染色、免疫組學、電鏡
6. 生理生化實驗
肝腎功能、抗氧化、免疫反應等生理免疫指標;動植物營養指標、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學實驗
基因組、轉錄調控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實驗
方案設計、整體實驗交付、標書寫作、論文潤色、協助投稿
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