在實驗動物研究中,不同的給藥途徑會影響藥物的吸收、生物利用度和特定實驗的適宜性,研究人員必須熟悉各種途徑,才能以最佳的方式對動物進(jìn)行給藥,得到科學(xué)的,合理的實驗結(jié)果,下面我們就來聊一聊常用鼠的給藥途徑。
No.1皮下注射
皮下注射給藥:是將藥液注入皮下結(jié)締組織,經(jīng)毛細(xì)血管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)的方法。在生物醫(yī)學(xué)研究中,皮下注射也是一種常見的給藥方式。
該技術(shù)通常用于皮膚較薄、皮下組織疏松且血管較少的部位,如頸背部、腋下或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。(建議常用部位是鼠兩耳提起后可出現(xiàn)一皮膚凹陷處,在此給藥可確保藥物給在皮下。)
凡是易溶解、無刺激性的藥物以及菌苗、疫苗、細(xì)胞等,都可以進(jìn)行皮下注射。
注射劑量:大鼠一般小于1ml/100g,小鼠一般為0.1~0.3ml/10g。總藥量:小鼠不超過0.5ml,大鼠不超過1ml。
注意事項:1.正確抓取動物,動物必須受到足夠?qū)捤傻淖ノ眨@樣皮膚才能活動起來。2.如果動物要接受多次皮下注射,可交替注射部位。
No.2皮內(nèi)注射
皮內(nèi)注射給藥:是將藥液注入皮膚的表皮和真皮之間,用于觀察皮膚血管的通透性變化或皮內(nèi)反應(yīng),接種、過敏實驗等。皮內(nèi)注射吸收較慢。皮內(nèi)注射一般選用背部脊柱兩側(cè)的皮膚。
注射劑量:大鼠一般小于0.1ml/次,小鼠一般小于0.05ml/次。
注意事項:不要回抽注射器。
No.3肌肉注射
肌肉注射一般用于有特定給藥方式要求的藥物,或不溶、難溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時可選擇肌肉注射。注射部位一般選擇肌肉豐富、血管較少的臀部。大小鼠后肢處肌肉較少,故一般不進(jìn)行肌肉注射。
注射劑量:大鼠單次注射量一般不要超過0.3ml。小鼠單次注射量一般不要超過0.1ml。
注意事項:1、正確抓取動物,確保動物的一個后腿是自由的,穩(wěn)定地注射。2、針應(yīng)該垂直于動物的皮膚插入。3、不要注射到后面的肌肉群,因為可能會損傷坐骨神經(jīng)。4、如果小鼠要接受多次肌肉注射,要雙腿交替注射。
皮下注射和肌肉注射,藥物主要是經(jīng)皮下和肌肉中的毛細(xì)血管吸收,吸收沒有靜脈注射完全,但皮下注射和肌肉注射也成功的避開了胃腸道和肝臟首過代謝。
No.4尾靜脈注射
靜脈注射:一種用注射器將少量或單一種類藥品注射到靜脈,使藥物直接進(jìn)入血液循環(huán)的一種方式。靜脈注射是效率最高的給藥方式,不需要溶劑的吸收,不存在收過代謝,生物利用率最高。可以通過一次性注射或滴注的方式注射入血管內(nèi)。
大小鼠的尾靜脈共有3條,其中尾部左右兩側(cè)各有一條,背側(cè)有一條。因為左右兩側(cè)靜脈角質(zhì)層較薄且易固定,所以常為注射所用。
注射劑量:小鼠單次注射量一般為0.1~0.2ml/10g。大鼠單次注射量一般為0.3~0.5ml/100g。
注意事項:
(1)如阻力較大,或注射時有隆起,則說明注射到了皮下。此時應(yīng)迅速抽出注射器,輕輕在原注射位點稍上的位置再次注射。
(2)靜脈血管充盈是保證注射成功率的重要因素。一般使用酒精在小鼠尾靜脈部位來回擦拭,由于小鼠尾靜脈很淺靜脈很淺,插入深度不宜超過斜面太多。
(3)注射開始盡可能靠近尾尖(遠(yuǎn)心端),如果第一次注射失敗,這樣還有未受損靜脈用來再次注射。
No.5腹腔注射
腹腔注射:將藥物注入動物胃腸道漿膜以外、腹膜以內(nèi)的注射方式。腹腔注射作為常用給藥方式的一種,方便易行,吸收快速,一般用于小鼠麻醉、藥物誘導(dǎo)等實驗,一般用于不適宜或經(jīng)胃腸道吸收效率較低的給藥,并且還能對幼鼠進(jìn)行誘導(dǎo)。
經(jīng)腹腔給藥,藥物吸收速度較靜脈注射慢,但是這種給藥方式可以注射的藥物體積要大于靜脈注射,對于個體較小的實驗動物給藥具有重要意義。
注射劑量:大鼠單次注射量一般為1.0~2.0ml/100g。小鼠單次注射量一般為0.1~0.2ml/10g。
注意事項:1、針頭刺破腹肌后會有落空感,此時針頭已進(jìn)入腹腔,應(yīng)停止進(jìn)針以免針頭刺入過深損傷內(nèi)臟。2、為避免傷及內(nèi)臟,應(yīng)使動物處于頭低位,使內(nèi)臟移向上腹。3、對于體重較小的小鼠,腹腔注射時針頭可以在腹部皮下穿行一小段距離,最好是從腹部一側(cè)進(jìn)針,穿過腹中線后在腹部的另一側(cè)進(jìn)入腹腔,注射完藥物后,緩緩拔出針頭,并輕微旋轉(zhuǎn)針頭,防止漏液。
小鼠尾靜脈注射對初學(xué)者來說,可能有一定難度,但注射是否成功容易判斷,不會對實驗結(jié)果造成影響。而腹腔注射雖然看似簡單,但如果操作不當(dāng),很容易造成注射失敗,并不被發(fā)現(xiàn),直接影響到實驗結(jié)果。
No.6經(jīng)口給藥法
對于實驗動物來說,常用的口服給藥方式包括直接口服(將藥物混入水或飼料中,動物自己覓食)和被動口服給藥(灌胃)。
口服給藥是將藥物混于飼料或溶于飲用水中,讓動物自由攝取。此方法優(yōu)點是操作簡單方便,缺點是藥物劑量不能保證準(zhǔn)確:因動物個體差異,采食量有差異,藥量難以精準(zhǔn)控制,不能客觀反應(yīng)實驗結(jié)果,故此法應(yīng)用較少。
灌胃給藥是指借助器械(灌胃針)將藥物溶液或混懸液直接灌入動物胃內(nèi)。此法操作簡便,可以實現(xiàn)精準(zhǔn)給藥,靈活控制給藥劑量,也能很好的模擬臨床中藥物經(jīng)口服后的一些列體內(nèi)作用,因此成為動物給藥眾多方法中被大家廣泛認(rèn)可的技術(shù)之一,作為一個科研工作者必須熟練掌握。
操作要點與注意事項:由于小鼠的氣管靠近食管,在灌胃過程中需要注意避免藥物進(jìn)入氣管導(dǎo)致小鼠窒息死亡。只能夠?qū)Ρ蛔ト〉摹⑶逍训膭游镞M(jìn)行灌胃,麻醉或鎮(zhèn)靜會增加誤吸的風(fēng)險(物質(zhì)無意中進(jìn)入肺部)。
小鼠的固定非常重要,盡量保持動物的舒適度以及實驗人員操作的便利性,以避免在灌胃過程中動物因為姿勢不適而掙扎,造成灌胃失敗。在灌注過程中動物,如出現(xiàn)嗆口、嘔吐或強烈掙扎等現(xiàn)象,應(yīng)立即停止灌注,拔出灌胃針重新進(jìn)行灌胃。推注過程要緩慢均勻,如注射量較大,應(yīng)當(dāng)采取間歇注射,即注射一定量后停頓一下再繼續(xù)。
灌胃針不可插入過深,一般插入小鼠3-4cm,大鼠4-6cm后即可注入藥物;
灌胃體積常為0.1-0.2ml/10g,過度的灌胃量易引起小鼠不適甚至死亡。常用灌胃量:小鼠0.1-0.8ml,大鼠1-3ml。
這么多給藥方法,在實際研究中,我們該如何選擇呢?
(1)多參照所開發(fā)藥物擬采用的臨床給藥方式并結(jié)合適應(yīng)癥(如靜脈和腹腔注射的吸收速度快,適合急癥處理)來選擇。從新藥研發(fā)角度來說,能口服最好,因為口服給藥是最方便、經(jīng)濟(jì)、安全的方式。
(2)根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇:如你要研究口服生物利用度就選用動物灌胃給藥,要研究腹腔給藥生物利用度就采用腹腔給藥方式。
(3)主要考慮藥物的溶解性,穩(wěn)定性及毒性等。
①口服給藥:適用的藥物劑型比較多,只要保證藥物是均勻且穩(wěn)定的就可以。如動物體內(nèi)胃腸道是有一定pH值的,有的區(qū)段酸性會很強,如果該藥物具有體內(nèi)pH不穩(wěn)定性就應(yīng)該選擇口服以外的給藥方式。如果發(fā)現(xiàn)藥物口服具有腸毒性時,就可以考慮選擇靜脈等其他給藥方式。
②靜脈給藥:對藥物劑型要求比較高,需完全溶解的溶液或者藥物顆粒比紅細(xì)胞小的多的體系,因此不溶的劑型是不能考慮靜脈注射的。
③腦內(nèi)給藥和皮下注射:腦內(nèi)和皮下給藥量很小,需結(jié)合給藥量。如同樣的給藥劑量下,腦內(nèi)注射和皮下注射配制的藥物濃度就要高一些,需要考慮到藥物溶解性是否滿足要求。
(4)技術(shù)難度,如長周期的靜脈注射給藥難以操作時,可考慮選擇生物利用度比靜脈差一點又好操作的腹腔給藥來進(jìn)行實驗。
不同給藥方式之間劑量換算估值如下表:
主營項目
1. 動物實驗
動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等
2. 細(xì)胞實驗
CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實驗、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株
3. 分子生物學(xué)
PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等
4. 蛋白實驗
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實驗
HE染色、免疫組學(xué)、電鏡
6. 生理生化實驗
肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學(xué)實驗
基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實驗
方案設(shè)計、整體實驗交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿
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