動物實驗 ▏小鼠骨髓間充質干細胞成骨誘導分化
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發(fā)表時間：2025-08-08
髓間充質干細胞是干細胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，屬于多能干細胞，間充質干細胞最初是在骨髓中被發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、來源廣泛，獲取簡單，易于分離培養(yǎng)，體外增殖力強等特點而日益受到人們的關注。目前發(fā)現(xiàn)其具有能夠分化形成至7種組織細胞，如成骨細胞、成脂細胞等組織細胞的潛能。可以為骨、肌肉等結締組織的損傷修復提供潛在的細胞來源，被認為是骨組織工程中最佳的種子細胞。
實驗原理
間充質干細胞（MSC）是干細胞的一種,具有向多種類型細胞分化的能力,可以分化為神經、骨、軟骨、肌腱、脂肪、上皮等多種細胞。茜素紅染色法是MSC細胞成骨誘導實驗操作和鑒定間充質干細胞向成骨細胞分化的一個重要方法，其原理是間充質干細胞向成骨細胞分化的過程中,在細胞表面沉積鈣鹽,形成鈣結節(jié),鈣離子與茜素紅螯合,被染成紅色或者紫紅色。
實驗步驟
01
細胞接種
取對數(shù)生長期的細胞，按照適宜細胞密度接種至包被后的培養(yǎng)器皿中，于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至匯合度70-80%，棄掉上清，加入成骨誘導分化培養(yǎng)基。
02
細胞分化誘導
每2-3天更換成骨誘導培養(yǎng)基，于37℃，5%CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約14-21天，并注意觀察細胞形態(tài)變化。根據細胞鈣鹽結晶析出和鈣質結節(jié)形成的情況，決定終止細胞誘導的時間，進行染色鑒定。
03
細胞固定
根據茜素紅試劑說明書進行細胞固定。
04
茜素紅染色
根據茜素紅試劑說明書加入適量茜素紅染液染20-30min，吸去茜素紅染液，用蒸餾水充分洗滌。
05
結果處理
顯微鏡下觀察成骨染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，鈣質結節(jié)會與茜素紅染料結合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。
注意事項
1. 實驗操作過程中要避免污染。
2. 接種細胞前可對培養(yǎng)器皿進行包被處理，以防止成骨誘導后期細胞出現(xiàn)成片脫落的現(xiàn)象。
3. 誘導后細胞易脫壁，換液操作要盡可能輕。必要時可進行半量換液。
4. 茜素紅染色時，若染色效果較淺可以適當延長時間，或選做蘇木素復染處理。
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主營項目
1. 動物實驗
動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等
2. 細胞實驗
CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉染、穩(wěn)定株
3. 分子生物學
PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等
4. 蛋白實驗
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實驗
HE染色、免疫組學、電鏡
6. 生理生化實驗
肝腎功能、抗氧化、免疫反應等生理免疫指標;動植物營養(yǎng)指標、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學實驗
基因組、轉錄調控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實驗
方案設計、整體實驗交付、標書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿
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