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- 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)
- 動(dòng)物飼養(yǎng) 疾病造模 行為學(xué)檢測(cè) 心功能 無(wú)創(chuàng)血壓 血常規(guī) 全自動(dòng)生化檢測(cè)等
- 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)
- CCK8/MTT 原代細(xì)胞分離 流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞劃痕 侵襲 遷移 EDU染色 轉(zhuǎn)染 穩(wěn)定株篩選
四大分子互作技術(shù)（ChIP/熒光素酶/Co-IP/Pull-down）實(shí)驗(yàn)原理全解析
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發(fā)表時(shí)間：2025-08-13
導(dǎo)語(yǔ)
在生命科學(xué)領(lǐng)域，分子間的相互作用是調(diào)控生命活動(dòng)的核心機(jī)制。無(wú)論是DNA與蛋白質(zhì)的“密碼對(duì)話”，還是蛋白質(zhì)之間的“協(xié)作網(wǎng)絡(luò)”，都需要通過精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)來(lái)揭示。本文用通俗易懂的語(yǔ)言，帶您了解ChIP、熒光素酶報(bào)告基因、Co-IP、Pull-down四大技術(shù)的原理、步驟和應(yīng)用場(chǎng)景，助您輕松掌握分子互作研究的核心工具！
一、
ChIP（染色質(zhì)免疫共沉淀）：捕捉DNA與蛋白的“約會(huì)證據(jù)”
原理
ChIP技術(shù)通過甲醛交聯(lián)“凍結(jié)”DNA與結(jié)合蛋白的相互作用，利用特異性抗體捕獲目標(biāo)蛋白及其結(jié)合的DNA片段，最終通過PCR或測(cè)序鎖定DNA序列。
應(yīng)用
研究轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)、組蛋白修飾位點(diǎn)等。
實(shí)驗(yàn)步驟
交聯(lián)固定：甲醛處理細(xì)胞，固定DNA-蛋白復(fù)合物
超聲破碎：將染色質(zhì)切割成200-1000bp片段
免疫沉淀：加入目標(biāo)蛋白抗體，捕獲復(fù)合物
解交聯(lián)純化：高溫去除蛋白，純化DNA
分析檢測(cè)：qPCR、測(cè)序或芯片分析
注意事項(xiàng)
?? 抗體特異性是關(guān)鍵
?? 超聲條件需優(yōu)化避免過度破碎
二、
熒光素酶報(bào)告基因：基因調(diào)控的“信號(hào)燈”
原理
將待研究的DNA調(diào)控序列插入熒光素酶報(bào)告基因上游，通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度反映轉(zhuǎn)錄因子對(duì)目標(biāo)序列的激活/抑制效應(yīng)。
應(yīng)用
啟動(dòng)子活性分析、miRNA靶標(biāo)驗(yàn)證等。
實(shí)驗(yàn)步驟
載體構(gòu)建：目標(biāo)序列克隆至熒光素酶報(bào)告載體
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：與過表達(dá)質(zhì)粒/干擾RNA共轉(zhuǎn)染
裂解檢測(cè)：加入熒光素底物，測(cè)定發(fā)光值
數(shù)據(jù)歸一化：通常用海腎熒光素酶作為內(nèi)參
注意事項(xiàng)
?? 設(shè)置空載體對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照
?? 避免細(xì)胞密度過高影響轉(zhuǎn)染效率
三、
Co-IP（免疫共沉淀）：蛋白質(zhì)“社交網(wǎng)絡(luò)”捕手
原理
利用抗體捕獲靶蛋白時(shí)，與其直接互作的蛋白會(huì)被共同沉淀，通過WB驗(yàn)證互作伴侶。
應(yīng)用
驗(yàn)證體內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用、復(fù)合體組分鑒定。
實(shí)驗(yàn)步驟
裂解樣本：使用非變性裂解液保持蛋白互作
預(yù)清除：用Protein A/G磁珠去除非特異性結(jié)合
抗體孵育：加入靶蛋白抗體或?qū)φ誌gG
沉淀洗滌：收集復(fù)合物并洗去雜質(zhì)
WB驗(yàn)證：檢測(cè)沉淀物中是否存在互作蛋白
注意事項(xiàng)
?? 避免劇烈震蕩導(dǎo)致復(fù)合物解離
?? 設(shè)置IgG陰性對(duì)照
四、
Pull-down：體外互作的“釣魚實(shí)驗(yàn)”
原理
將誘餌蛋白（如GST標(biāo)簽蛋白）固定在基質(zhì)上，與“獵物蛋白”溶液孵育，捕獲特異性互作分子。
應(yīng)用
驗(yàn)證直接相互作用、篩選互作蛋白。
實(shí)驗(yàn)步驟
誘餌蛋白制備：表達(dá)純化帶標(biāo)簽的重組蛋白
基質(zhì)結(jié)合：將誘餌蛋白固定到GST/鎳柱
孵育結(jié)合：與細(xì)胞裂解液/純化蛋白共孵育
洗脫分析：SDS-PAGE或質(zhì)譜鑒定結(jié)合蛋白
注意事項(xiàng)
?? 需設(shè)置空載體蛋白對(duì)照
?? 高鹽洗滌減少非特異性結(jié)合
技術(shù)對(duì)比速查表
結(jié)語(yǔ)
分子互作技術(shù)如同解碼生命的“偵探工具”，選擇合適的方法需要根據(jù)研究目標(biāo)（體內(nèi)/體外、直接/間接作用）綜合判斷。掌握這些技術(shù)的原理和操作要點(diǎn)，將為您的課題研究提供堅(jiān)實(shí)的技術(shù)支撐！
如有需要，請(qǐng)聯(lián)系我們~
主營(yíng)項(xiàng)目
1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測(cè)、心功能、無(wú)創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測(cè)等
2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株
3. 分子生物學(xué)
PCR檢測(cè)、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長(zhǎng)度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測(cè)等
4. 蛋白實(shí)驗(yàn)
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實(shí)驗(yàn)
HE染色、免疫組學(xué)、電鏡
6. 生理生化實(shí)驗(yàn)
肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)
基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實(shí)驗(yàn)
方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤(rùn)色、協(xié)助投稿
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