動物實驗知多少——裸鼠皮下成瘤實驗技巧
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發表時間：2025-09-02
背景
裸鼠成瘤實驗，是一種用于研究腫瘤發生和發展的動物實驗。裸鼠是一種無毛、免疫缺陷的小鼠，在體內移植外源性腫瘤細胞后，由于其免疫系統不完整，不會對異物產生免疫反應，因此，腫瘤細胞可以不受抵抗地存活和生長。
通過裸鼠成瘤實驗，可以研究腫瘤細胞在體內的生長、轉移、藥物治療等方面的情況，為開發新的腫瘤治療方法和藥物提供重要的實驗數據。但是，裸鼠成瘤實驗涉及動物權益和倫理問題，需要在符合倫理和法律規定的條件下進行。
實驗室常見成瘤細胞/Common tumorigenic cells in laboratory
常規較容易成瘤的細胞：Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(大細胞肺癌)， A431(表皮癌)，SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（人黑色素瘤細胞），SGC7901 人胃腫瘤細胞 ，KB人口腔表皮樣癌細胞
成瘤較慢的細胞：CNE（鼻咽癌），A549（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29（結腸癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌 ， CT26 （小鼠結腸癌細胞 ），SH-SY5Y (人神經母細胞瘤細胞 ) ， U251 （人膠質瘤細胞） ， BGC-823（人胃癌細胞） ，PC-3 （人前列腺癌細胞）
一些比較有爭議的細胞：Hela（宮頸癌），HCT（人回盲腸癌細胞/人結直腸癌腺癌細胞）。其他：BMSC（骨髓間充質干細胞）
成瘤實驗技巧要點 /Key points of skill
細胞的狀態是成瘤實驗的關鍵，所以細胞生長狀態一定要好，取處于對數生長期的細胞，細胞達80-90%左右密度為宜。收集細胞前一天晚上更換新鮮培養基。
胰酶消化細胞后用預冷的PBS洗兩遍，目的為去除細胞中殘余的血清。
用PBS或者無血清培養基吹打細胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細胞量為1-5×10^6個細胞/支，接種體積為0.1-0.2ml，因此細胞懸液的濃度為1-5×10^7個細胞/ml，如若有條件的實驗室，也可以加基質膠以加速瘤塊的生成，基質膠與PBS或無血清的比列為1:1。
細胞消化后應盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時內完成（如果接種量大，可以分批接種），途中將細胞懸液放在冰上降低細胞的代謝以保持細胞的活性。
選擇的裸鼠一般在4-6周齡，體重16-18g左右，種植部位選擇血供豐富區域，如腋窩中后部。
接種前用槍將細胞懸液充分的吹散，防止細胞成團而降低細胞成活率，并且導致小鼠接種細胞數量的差異過大。
成瘤實驗操作步驟 /Operating procedure
接種時選擇好部位進針，選擇血管豐富且容易操作的部位接種，如腋下、腹股溝、側腹部及頸背部等部位都是較好操作的部位。
接種前用75%酒精棉球擦拭消毒進針位置，左手抓取固定裸鼠，于裸鼠左側腋窩處皮下注射，接種時，針頭在皮下進針深一點，約1cm深，以減少注射時漏液和污染的可能性，注射前針頭稍微動一動，以便細胞接種成團，減少注射后細胞懸液從針眼溢出。
接種體積為100μL-200μL，可看見明顯鼓包。(這一過程盡量在半小時內完成，途中細胞懸液放在冰上以減緩細胞凋亡及防止出現凝膠現象。）
接種后1-2周左右可以見到皮下開始出現腫塊。
注意要點
根據腫瘤細胞的特性和接種細胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大，一般不要超過2000mm3。
腫瘤大小測量一般為1周兩次，游標卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長軸，b為短軸)。
皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。
主營項目
1. 動物實驗
動物飼養、疾病造模、行為學檢測、心功能、無創血壓、血常規、全自動生化檢測等
2. 細胞實驗
CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉染、穩定株
3. 分子生物學
PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等
4. 蛋白實驗
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實驗
HE染色、免疫組學、電鏡
6. 生理生化實驗
肝腎功能、抗氧化、免疫反應等生理免疫指標;動植物營養指標、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學實驗
基因組、轉錄調控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實驗
方案設計、整體實驗交付、標書寫作、論文潤色、協助投稿
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